फ्रेट पेप्टाइड तंत्रज्ञान

फ्लोरोसेन्स रेझोनान्स एनर्जी ट्रान्सफर (FRET)

फ्लोरोसेन्स रेझोनान्स एनर्जी ट्रान्सफर (FRET) ही एक नॉन-रेडिएटिव्ह एनर्जी ट्रान्सफर प्रक्रिया आहे ज्यामध्ये इंटरमॉलिक्युलर इलेक्ट्रिक जोडप्यांच्या परस्परसंवादाद्वारे दाता उत्तेजित अवस्थेतील ऊर्जा स्वीकारकर्त्याच्या उत्तेजित अवस्थेत हस्तांतरित केली जाते.या प्रक्रियेत फोटॉनचा समावेश होत नाही आणि त्यामुळे ते विकिरणविरहित असते.या परीक्षणाचे जलद, संवेदनशील आणि साधेपणाचे फायदे आहेत.

FRET परीक्षणामध्ये वापरलेला रंग एकसारखा असू शकतो.परंतु बहुतेक ऍप्लिकेशन्समध्ये, प्रत्यक्षात भिन्न रंग वापरले जातात.थोडक्यात, प्रकाशमय अनुनाद उर्जेचे हस्तांतरण म्हणजे दात्याच्या (डाय 1) कडून स्वीकारकर्त्याकडे (डाय 2) द्विध्रुवांच्या जोडीचे हस्तांतरण जेव्हा दाता गट उत्साही असतो.सर्वसाधारणपणे, डोनर फ्लोरोफोर ग्रुपचा उत्सर्जन स्पेक्ट्रम स्वीकारकर्ता गटाच्या शोषण स्पेक्ट्रमसह ओव्हरलॅप होतो."जेव्हा दोन फ्लोरोफोर्समधील अंतर योग्य असते (10 - 100 A), तेव्हा फ्लोरोफोर ऊर्जेचे दात्याकडून स्वीकारकर्त्याकडे हस्तांतरण पाहिले जाऊ शकते."ऊर्जा हस्तांतरणाची पद्धत रिसेप्टरच्या रासायनिक संरचनेवर अवलंबून असते:

1. आण्विक कंपनात रूपांतरित होते, म्हणजेच ऊर्जा हस्तांतरणाचा तेजस्वी प्रकाश अदृश्य होतो.(ग्राहक हा प्रकाश शमन करणारा आहे)

2. उत्सर्जन हे रिसेप्टरपेक्षा जास्त तीव्र असते, परिणामी दुय्यम प्रतिदीप्ति स्पेक्ट्रममध्ये रेड शिफ्ट होते.”(रिसेप्टर्स चमकदार उत्सर्जक आहेत).

देणगीदार गट (EDANS) आणि स्वीकारकर्ता जनुक (DABCYL) HIV प्रोटीजच्या नैसर्गिक सब्सट्रेटशी एकसमानपणे जोडलेले आहेत आणि जेव्हा सब्सट्रेट डिस्कनेक्ट होत नाही, तेव्हा DABCYL EDANS क्वेंल करू शकते आणि नंतर फ्लोरिनला ओळखता येत नाही.HIV-1 प्रोटीज डिस्कनेक्शन झाल्यावर, DABCYL द्वारे EDANS यापुढे शमवले जात नाही, आणि EDANS luciferases नंतर शोधले जाऊ शकतात.EDANS च्या फ्लोरोसेन्स तीव्रतेतील बदलांद्वारे प्रोटीज इनहिबिटरच्या उपलब्धतेचे परीक्षण केले जाऊ शकते.

FRET पेप्टाइड्स हे पेप्टिडेसच्या गैर-विशिष्टतेचा अभ्यास करण्यासाठी सोयीस्कर साधने आहेत.त्याच्या प्रतिक्रिया प्रक्रियेचे सतत निरीक्षण केले जाऊ शकत असल्याने, ते एंजाइम क्रियाकलाप शोधण्यासाठी एक सोयीस्कर पद्धत प्रदान करते.दाता/स्वीकारकर्त्याद्वारे पेप्टाइड बॉण्ड्सच्या हायड्रोलिसिसनंतर तयार होणारी चमक नॅनोमोलर एकाग्रतेवर एंजाइम क्रियाकलापांचे मोजमाप प्रदान करते.जेव्हा FRET पेप्टाइड अखंड असतो, तेव्हा ते अंतर्गत फ्लॅश अचानक गायब झाल्याचे दर्शविते, परंतु जेव्हा दाता/स्वीकारकर्त्याच्या विरुद्ध असलेले कोणतेही पेप्टाइड बंध तुटतात तेव्हा ते एक फ्लॅश सोडते, जे सतत शोधले जाऊ शकते आणि नंतर एन्झाईम क्रियाकलाप परिमाण करता येतो.